病毒保存液病毒滅活效果檢測

病毒保存液適用於(yu) 病毒、流感病毒、手足口病毒等常見病毒樣本采集保存運輸工作，是采樣管內(nei) 浸末采樣拭子病毒樣本一種保護病毒的被檢測物質的液體(ti) ，可采集咽拭子、鼻拭子或特定部位組織樣本，儲(chu) 存的樣本可用於(yu) 後續的核酸提取或純化等臨(lin) 床實驗。

病毒保存液通常分為(wei) 兩(liang) 種，一種是非滅活型，能夠保護病毒的蛋白和核酸，另一種是滅活型，通常含有滅活病毒的裂解鹽，裂解蛋白而保護核酸。

滅活型病毒保存液：主要是核酸提取裂解液改良的病毒裂解型保存液，裏麵添加有高濃度的裂解鹽，能夠迅速高效地使待測樣本利的病毒蛋白裂解失活，可以有效防止感染，同時又含有Rnase酶抑製劑，能保護病毒核酸不被降解，後續的NT-PCR實驗隻要能檢測出病毒的核酸即可以做出診斷。而且能在常溫下保存相對較長的時間。

非滅活型保存液：主要是以運送培養(yang) 基為(wei) 基礎改良的病毒維持液型保存液。這一種是同時保留了病毒的蛋白質外殼以及病毒核酸DNA或者RNA，這樣病毒在體(ti) 外具有蛋白抗原表位和核酸的完整性，當然操作失誤時也有一定的感染性風險。采樣後長時間保存需要保持嚴(yan) 格低溫。

中科檢測可開展針對流感病毒、腸道病毒、冠狀病毒、皰疹病毒等病毒保存液病毒滅活效果檢測，病毒保存液檢測可針對不同保存溫度、不同保存時間等不同條件下的病毒活性及病毒滅活率。

病毒保存液檢測方法

1. 試驗對象：

毒株:甲型流感病毒HINI (VR- 1469)

細胞: MDCK細胞.

2.試驗步驟：

1）取樣品病毒保存液（非滅活型） 9.8mL，加入0.2mL病毒原液混勻，分裝若幹測試液，存至要求溫度;

2）保存至對應天數後取出測試液，檢測病毒滴度；

a）10倍倍比稀釋測試液；

b）將稀釋液加入含生長至單層的MDCK細胞的96孔細胞培養(yang) 板上，並設置正常對照組，加等量培養(yang) 液；

c）置於(yu) 35'C、5%CO2的培養(yang) 箱中孵育60 min後棄去上清液，加入雙抗400 IU/mL的維持培養(yang) 液繼續孵育3~5天，每天觀察細胞增長狀況；

d）當接種病毒的MDCK細胞出現變圓或縮小等病變現象時，記錄產(chan) 生細胞病變的情況;

e）根據Reed-Muench公式計算半數感染量TCID50。

病毒保存液病毒滅活效果檢測